細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項(xiàng)!

　　一、 復(fù)蘇

　　1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

　　2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

　　4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

　　5. 3天換一次培養(yǎng)基。

　　二、 傳代

　　1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

　　2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

　　3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。

　　4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

　　5. 用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來。

　　6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。

　　8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。

　　三、 凍存把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃  30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制： 70%的培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.  DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

　　細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項(xiàng)!我司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。  既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)模化生產(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。