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本生闡述:ELISA試劑盒該如何操作及怎么計(jì)算

更新時間:2023-01-09    點(diǎn)擊次數(shù):917

  本生闡述:ELISA試劑盒該如何操作及怎么計(jì)算


  ELISA試劑盒操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

  8. 操作過程中除了按照步驟來操作,我們還需要額外準(zhǔn)備酶標(biāo)儀(450nm),高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL,37℃恒溫箱以及蒸餾水或去離子水。

  9. 要注意試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

  以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。


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