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BUNSEN熱訊:胎牛血清常見問題解答
Q: 應(yīng)該如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
A:建議血清應(yīng)保存在-20°C。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。解凍時(shí),建議將血清從冷凍室先移至2-8°C冰箱解凍,再放置于室溫進(jìn)行解凍。請注意,解凍過程中需要經(jīng)常搖晃混合。BUNSEN不推薦將FBS在37C長時(shí)間孵育解凍,胎牛血清。
Q: 熱滅活是必須的嗎?
A:實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染。熱滅活過程中局部溫度過高,搖顯不均勻,滅活時(shí)間過長,都會(huì)造成血清品質(zhì)下降。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
Q: 如何進(jìn)行血清的熱滅活?胎牛血清
A:滅活之前必須先搖勻解凍的血清并恢復(fù)到室溫
(1)取部分搖勻的血清 (50ML離心管) ,選用同規(guī)格的對照管一個(gè)。;
(2)對照管內(nèi)放入與血清等體積的水:
Q: 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎 ?
A:一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在2周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。
(3)溫度預(yù)試:對照管內(nèi)插入溫度計(jì),顯示56°C時(shí),將恢復(fù)到室溫的血清,放入水浴鍋。滅活過程中,經(jīng)常輕輕晃動(dòng)搖勻 (如: 每隔5MIN),保證溫度均一。
Q: 細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎 ? 如何處理?
A:一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何
變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細(xì)胞生長過老,破碎的細(xì)胞殘骸:
(2)配制培養(yǎng)基的 PH值偏高,不宜細(xì)胞生長:
(3)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除
(4)血清等級不足以維持細(xì)胞良好的生長。
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