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BUNSEN本生——血清常見問題及解決方法

更新時間:2023-05-31    點擊次數(shù):530

  BUNSEN本生——血清常見問題及解決方法

 

  正常情況下,融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是?

  血清為動物來源,成分復(fù)雜,不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下,它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

  >> 血清應(yīng)如何保存?

  未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃,避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃,在產(chǎn)品質(zhì)量證書標識的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

  >> 血清的有效期是多久?

  大部分血清效期是5年,針對每個批次,請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。

  >> 血清應(yīng)如何融解?

  從冰箱中取出血清,放于2-8℃融化,融化過程中不時旋轉(zhuǎn)(swirling mix)混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

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  >> 為什么有時血清中出現(xiàn)絮狀沉淀?是否需要去除?如何去除?

  多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成,最常見的原因之一是融化過程中,脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會影響產(chǎn)品質(zhì)量??梢?00g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般最為常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。

  >> 為什么存放于冰箱中的血清會出現(xiàn)沉淀?如何避免該現(xiàn)象?

  在2-8°C條件下存放,血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀,如血纖蛋白(fibrin),單體時處于溶解狀態(tài),在凍融過程中會發(fā)生聚集,形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會影響血清的性能。可以400g離心5分鐘,取上清,然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般最為常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象,建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱,避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。

  >> 血清是否需要做滅活處理?

  這取決于您的應(yīng)用。

  滅活過程中,會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時,才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白,因為補體在機體中參與細胞殺傷,巨噬細胞和淋巴細胞活化,肥大細胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細胞和干細胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進行滅活處理。

  >> 如何進行血清滅活處理?

  血清請先按上述“血清應(yīng)如何融解"中的操作步驟融化和混勻,熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當溫度計顯示達到56℃左右,開始計時。56 ℃水浴后,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。

  >> 如何應(yīng)對血清的批間差?

  血清產(chǎn)品通過嚴格的質(zhì)控盡可能縮小批間差,但由于血清本身的特點和來源,無法*避免批間差??蛻艨梢酝ㄟ^做預(yù)測試等方式,選擇可滿足要求的血清批次。

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